| 초록 |
□ 연구개요 2010년 넙치에서 처음 보고된 Kudoa septempunctata는 2012년 식중독 원인체로 보고되었고, 이후 한국의 양식 넙치 산업에 큰 위기를 가져왔다. 수출 감소와 소비위축으로 인한 생산단가가 하락하였고, 많은 양식 어가에 경제적 손실을 입혔으며, 한 국내의 넙치회 식중독 관련 역학 연구에서도 K. septempunctata 식중독 관련성을 보고하였다. 본 연구는 K. septempunctata에 의한 식중독에 대한 대책으로 생산단계에서 감염 예방 및 치료제를 위한 구제법 개발을 최종 목적으로 두고 있으며, 그 첫 단계로서 K. septempunctata의 전사체 분석과 백신 항원으로서의 protease의 가능성 확인을 위하여 재조합 protease 발현 시켜 항원성을 확인하였다. □ 연구 목표대비 연구결과 본 연구에서는 살아있는 K. septempunctata를 분리하여 spore의 농도별 생존 활성을 이용하여 Wst-1 assay를 실시하고 이를 이용하여 in vitro에서 여러 약제 감수성 test를 할 수 있는 방법을 개발하고자 하였다. 연구결과 2.1 X 10 5 spore 이상 되는 농도에서 음성 대조구와 차이를 보이는 것을 확인하였다. 또한 K. septempunctata cDNA database를 구축하고 protease 관련 유전자를 탐색하여, 24,886개의 gene과 45,050의 transcripts를 확보하였으며, 이중 protease 관련 110개의 전사체를 확인하였다. Protease inhibition assay를 통해, myxospore상태의 K. septempunctata는 protease inhibitor에 의해 생존성에 영향을 받지 않는 것으로 확인하였고, 이는 실제 백신이나 치료제 개발은 myxospore 상태 이전 발달 단계에 목표를 맞추어 진행해야 하는 것이 효율적이라는 것으로 판단하여, 기생충 발달단계에서 가장 많은 영향을 미치는 Cysteine protease중 cathepsin L을 recombinant protease를 제작하였다. Recombinant cathepsin L는 pro-cathepsin L서열을 pMal-c5x vector를 이용하여 IPTG 0.1mM, 24h, 15℃ 조건에서 E. coli strain(ER2523)에서 발현시키는 것이 최적임을 확인하였다. Recombinant cathepsin L을 넙치 복강에 주입하여 혈청을 확보한 후 ELISA를 통하여 대조구에 비해 높은 항체가가 형성되는 것을 확인하였고, Western blotting결과 넙치항체는 recombinant cathepsin L과 pH5 buffer에서 sonication한 K. septempunctata lysate에서 반응하였다. □ 연구개발결과의 중요성 넙치에 감염된 K. septempunctata와 식중독과의 관련성은 아직 논란의 여지로 남아 있으며, K. septempunctata와 식중독 관련성 여부에 대한 연구 결과는 함께 보고되고 있다. 그러나 이제는 K. septempunctata의 식중독과의 연관성을 밝히는 것보다 K. septempunctata가 감염되어 있지 않은 양식 넙치를 생산하는 것이 더 중요한 시기이며, 이를 위하여 감염을 예방할 수 있는 백신을 개발하거나 감염을 치료할 수 있는 치료제 개발을 목표로 연구를 진행해 나가야 할 것이다. 본 연구 결과는 향후 진행해야 할 연구의 기초 자료로서 수많은 정보를 제공하고 있으며, K. septempunctata에 대한 백신의 가능성도 확인하였다. 따라서 본연구결과는 앞으로 양식 넙치에서의 쿠도아충 문제 해결 및 국민 보건 향상에 크게 기여할 수 있을 것으로 사료된다. (출처 : 연구결과 요약문 2p) |
