| 저자(한글) |
Kim, Yun Jae,Lee, Jae Eun,Lee, Hyun Sook,Kwon, Kae Kyoung,Kang, Sung Gyun,Lee, Jung-Hyun |
| 초록 |
Thermococcus pacificus P-4의 유전체 서열 분석을 통하여 예측되는 GH1 ${ beta}$ -glucosidase를 암호화하는 유전자를 동정하였다. 그 유전자는 487 아미노산들을 암호화하는 1,464 bp 나타내었으며, 그 아미노산 서열은 Pyrococcus furiosus ${ beta}$ -glucosidase와 77% 상동성을 나타내었다. 그 유전자는 Escherichia coli 시스템 내에서 복제 및 발현하였다. 재조합 된 단백질은 금속 친화크로마토그래피를 통하여 정제하고 특성을 분석하였다. 정제된 단백질(Tpa-Glu)은 pH 7.5와 $75^{ circ}C$ 에서 최적활성을 나타내었으며, 열안정성은 $90^{ circ}C$ 에서 약 6시간의 반감기를 보였다. Tpa-Glu는 pNP- ${ beta}$ -glucopyranoside, pNP- ${ beta}$ -galactopyranoside, pNP- ${ beta}$ -mannopyranoside, 그리고 pNP- ${ beta}$ -xylopyranoside 순으로 우수한 $k_{cat}/K_m$ 값을 나타내었다. 또한, Tpa-Glu는 ${ beta}$ -1,3-linked polysaccharide (laminarin) 그리고 ${ beta}$ -1,3-와 ${ beta}$ -1,4-linked oligosaccharides에 대하여 exo-hydrolyzing 활성을 보였다. 본 연구는 초고온 고세균으로터 ${ beta}$ -glucosidase가 exohydrolyzing 활성을 처음 확인한 것으로 이 효소는 laminarin의 당화공정에 ${ beta}$ -1,3-endoglucanase와 함께 적용할 수 있을 것으로 기대된다. |
